Cell stock 및 Cell thawing

Cell-freezing-container

Cell-freezing-containerCell stock (세포 저장하기)

Cell stock 준비

• Cell stock 전용 freezing medium
• 배양 배지
• 1ml Cell stock vial
• Cell container
• 아이소프로필알코올(Isopropyl alcohol)

---

• Cell culture시 사용하는 FBS 
• DMSO(Dimethyl sulfoxide)
• 1ml Cell stock vial
• Cell container
• 아이소프로필 알코올(Isopropyl alcohol)

---

계대 배양 할 때 원하는 양만큼의 세포를 유지하고 나머지는 폐기하거나 Stock를 만들어 저장해 놓습니다. 세포를 Stock 하는 방법에는 여러 가지가 있는데, 제가 아는 두 가지 방법을 소개하고자 합니다.

 

<Freezing medium>

1. 계대 배양하고 남은 세포를 원심분리기를 이용하여 다시 모아줍니다.
2. 세포를 Tapping하여 잘 풀어줍니다.
3. Freezing medium의 농도를 배양 배지를 이용하여 1x로 맞춰 줍니다.
4. 세포를 분주하기 위해 원하는 농도에 맞춰 배양배지와 Freezing medum을 섞은 용액을 넣어줍니다.
5. 세포를 균일하게 잘 풀어준 후 Cell stock vial에 1ml씩 분주해 줍니다.
6. 아이소프로필 알코올을 채운 Cell container에 넣어줍니다.
7. 초저온 냉동고(Deep Freezer)에 2일간 보관 후 액체질소가 들어있는 액체질소탱크에 옮겨줍니다.

---

<FBS+DMSO>

1. 계대 배양하고 남은 세포를 원심분리기를 이용하여 다시 모아줍니다.
2. 세포를 Tapping하여 잘 풀어줍니다.
3. 원하는 농도를 맞춰 FBS를 세포에 넣어줍니다. 
4. 세포를 균일하게 잘 풀어준 후 FBS의 5%에 해당하는 양의 DMSO를 첨가해줍니다.
5. Cell stock vial에 1ml씩 분주해 줍니다.
6. 아이소프로필 알코올을 채운 Cell container에 넣어줍니다.
7. 초저온냉동고(Deep Freezer)에 2일간 보관 후 액체질소가 들어있는 액체질소탱크에 옮겨줍니다.

---

Cell thawing (세포 풀어주기)

Cell thawing 준비

• 동결된 세포
• 배양배지
• 세포배양 플라스크 혹은 Dish

---

배양하던 세포가 수명을 다했거나 새로운 세포를 배양해야 할 때 세포를 새로 풀어주어야 합니다.

 

1. 액체질소 탱크 안에서 배양하고자 하는 세포가 담긴 vial을 가져옵니다.
2. 항온수조에서 동결된 세포를 2/3 정도 녹여줍니다.
3. BSC 안으로 가져온 후 원하는 만큼의 배양 배지와 녹은 세포를 튜브에 넣어줍니다.
4. 원심분리기를 이용하여 세포를 모아줍니다.
5. 상등액을 버린 후 세포를 Tapping 하여 풀어줍니다.
6. 배양 배지를 첨가하여 세포를 풀어준 후 세포 계수법에 따라 세포를 계수해줍니다.
7. 원하는 농도를 맞춰 세포 배양 플라스크 혹은 Dish에 배양해줍니다.

2022.12.05 - [실험] - 세포 수 계수 및 세포 생존율 측정

세포 수 계수 및 세포 생존율 측정